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關于PIPETTY電動移液器在CCK-8實驗中的應用

一、方案摘要:CCK-8全稱Cell Counting Kit-8試劑,可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。

二、方案詳情:CCK-8全稱Cell Counting Kit-8試劑,可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。為了減少CCK-8實驗復孔之間的差異,鋪板時要注意鋪均勻。

實驗原理

CCK8全稱Cell Counting Kit-8試劑,可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。其基本原理為:該試劑中含有水溶性的四唑鹽WST-8[化學名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽],它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產物(Formazan dye)。生成的甲瓚物的數量與活細胞的數量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。

                   CKK-8檢測原理


三、操作步驟


1、先在蓋子上標記好信息

2、孔板最外圈加PBS

3、先用細胞計數器計數細胞懸液中的細胞數量,最好不要超過10^8/ML,然后將PIPETTY移液槍調到混勻模式,吹勻細胞懸液(如果用普通移液槍的話,細胞一定要吹打均勻,呈單細胞!)

4、將移液槍調到100μL的分液模式開始鋪細胞,為了避免細胞分布不均勻,先用移液槍將吹打均勻的細胞吸起來,讓后將槍頭緊貼著孔的一側壁(注意槍頭的尖不要接觸孔底),然后將槍頭中的細胞緩緩的打下去,種好之后千萬不要搖晃板子。

5、第一個細胞鋪完啦,現在重復以上步驟開始鋪第二個細胞,(這里有個小TIPS,如果用普通移液槍需要鋪10個孔混勻一次細胞液,避免細胞沉降帶來誤差,但是PIPETTY移液槍非常便捷,一步到位,吹打一次就OK啦)



補充:從6孔板到96空板要細胞分散均勻,先用培養基把細胞稀釋好,再把培養板放在適當的位置,加入細胞時和加入細胞后不移動培養板;如果空中有的地方沒有培養基可吹打,但不要移動培養板,加入細胞后靜置20-30分鐘再移入培養箱。這樣細胞一般都能長的很均勻。當然,前提是細胞消化的很好。

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